Nghiên cứu Màu sắc myeloperoxidase cải thiện chẩn đoán bệnh máu

Nhuộm Myeloperoxidase (MPO), còn được gọi là nhuộm peroxidase bạch cầu (POX), là một phương pháp nhuộm hóa tế bào được sử dụng rộng rãi. Chủ yếu được sử dụng để nhuộm các tế bào tủy xương và phết máu, kỹ thuật này phát hiện hoạt động peroxidase nội bào để hỗ trợ chẩn đoán các rối loạn huyết học, đặc biệt là trong phân loại bệnh bạch cầu.

Nhuộm MPO dựa trên phản ứng xúc tác của peroxidase nội bào. Enzyme này phân hủy các oxit để tạo ra oxy, sau đó phản ứng với kali iodide để tạo thành iốt. Iốt kết hợp với thuốc nhuộm Wright-Giemsa, tạo ra các hạt màu trong tế bào chất, cho thấy sự phân bố peroxidase dưới kính hiển vi. Các loại tế bào khác nhau thể hiện hàm lượng và kiểu phân bố peroxidase khác nhau, cho phép nhuộm MPO phân biệt giữa chúng.

Nhuộm MPO tiêu chuẩn yêu cầu các bộ thuốc thử chuyên dụng để đảm bảo độ chính xác và độ tin cậy. Một bộ điển hình chứa:

• Dung dịch A: Dung dịch Eosin - Một loại thuốc nhuộm có tính axit, nhuộm tế bào chất màu đỏ hoặc hồng
• Dung dịch B: Azure II - Một loại thuốc nhuộm cơ bản, nhuộm nhân tế bào màu xanh lam hoặc tím
• Dung dịch C: Đệm PBS kali iodide - Chứa chất nền phản ứng peroxidase và duy trì độ ổn định pH
• Dung dịch D: Thuốc nhuộm Wright-Giemsa - Một loại thuốc nhuộm đa năng giúp tăng cường hình thái tế bào

Bộ dụng cụ có sẵn với nhiều kích cỡ khác nhau (cấu hình 5 xét nghiệm, 20 xét nghiệm và 100 xét nghiệm) để đáp ứng các nhu cầu khác nhau của phòng thí nghiệm.

1. Chuẩn bị dung dịch làm việc: Trộn Dung dịch C với Dung dịch D (thường là tỷ lệ 1,0ml:250µl). Sử dụng trong vòng hai giờ.
2. Cố định phết: Cố định các phết tủy xương hoặc máu đã chuẩn bị bằng methanol hoặc ethanol trong 5-10 phút.
3. Nhuộm: Nhúng các phết đã cố định vào dung dịch làm việc trong 5-10 phút, kiểm soát nhiệt độ và độ ẩm.
4. Rửa: Rửa nhẹ bằng nước cất hoặc đệm PBS để loại bỏ thuốc nhuộm dư thừa.
5. Nhuộm đối màu (tùy chọn): Sử dụng hematoxylin để tăng cường độ tương phản của nhân.
6. Làm khô: Làm khô bằng không khí hoặc sử dụng máy sấy tóc.
7. Soi kính hiển vi: Kiểm tra các phết đã nhuộm để đánh giá hoạt động và sự phân bố của peroxidase.

Giải thích kết quả yêu cầu chuyên môn hóa. Các phát hiện phổ biến bao gồm:

• Phản ứng dương tính: Hạt tế bào chất màu đỏ-nâu đến xanh đậm (dương tính yếu so với dương tính mạnh). Các hạt có thể bao phủ toàn bộ tế bào chất hoặc che khuất nhân.
• Phản ứng âm tính: Tế bào chất màu xanh lam không có hạt và nhân màu tím-đỏ đồng nhất.
• Bạch cầu ái toan: Thể hiện sự nhuộm màu xanh đậm mạnh, đôi khi có các tinh thể hình kim ngoài tế bào.

• Phân loại bệnh bạch cầu: Phân biệt bệnh bạch cầu dòng tủy (MPO dương tính) với bệnh bạch cầu dòng lympho (MPO âm tính), hướng dẫn các quyết định điều trị.
• Chẩn đoán bệnh bạch cầu dòng tủy cấp tính (AML): Xác nhận nguồn gốc dòng tủy và hỗ trợ phân nhóm phụ, với tỷ lệ dương tính khác nhau cho thấy các phân nhóm AML khác nhau.
• Đánh giá hội chứng rối loạn sinh tủy (MDS): Đánh giá sự trưởng thành và biệt hóa tế bào, với các kiểu MPO bất thường gợi ý MDS.
• Các rối loạn huyết học khác: Hữu ích trong việc chẩn đoán bệnh bạch cầu dòng tủy mãn tính và xơ tủy.

• Chất lượng thuốc thử và điều kiện bảo quản
• Tuân thủ nghiêm ngặt quy trình
• Chuẩn bị phết thích hợp
• Thời gian nhuộm tối ưu
• Đánh giá kính hiển vi chuyên môn của các nhà bệnh lý học

Những tiến bộ công nghệ tiếp tục tăng cường nhuộm MPO. Hóa mô miễn dịch hiện kết hợp MPO với các dấu hiệu miễn dịch để có độ chính xác cao hơn, trong khi tế bào dòng chảy cho phép phát hiện MPO định lượng. Khi phương pháp hóa tế bào cổ điển này phát triển, nó hứa hẹn sẽ mang lại những đóng góp lớn hơn nữa cho việc chẩn đoán và điều trị huyết học.